2 材料与方法
2.1 试验材料
本研究以栽种于四川农业大学园艺生物技术研究中心枇杷园的十二年生‘大五星’枇杷为材料。
2.2 试验方法2.2.1 试验设计
用“爱多收”（厂家：日本旭化学株式会社，成分：邻硝基苯酚钠、对硝基苯酚钠和5-硝基邻甲氧基苯酚钠）、“壮果蒂灵”（厂家：陕西省渭南高新区促花王科技有限公司，成分：植物阳离子活性剂）、“绿芬威”（厂家：英国海德鲁光合有限公司，主要成分：磷、钙、锌、硫）和清水组成9个处理，见表1。
处理1-7都添加0.2%尿素、0.2%磷酸二氢钾。处理8（对照1）仅用0.2%尿素、0.2%磷酸二氢钾，处理9（对照2）仅用清水。试验参考刘权的单株区组法设计[83]，在十二年生的4株‘大五星’枇杷树上进行（树1、树2、树3、树4），每株树为一次重复，共4次重复，随机区组设计，以主枝或副主枝为小区。每重复每处理15个果穗，对供试果穗进行疏果，每果穗留3果，每处理共60个果穗、180个果。
处理1-7都添加0.2%尿素、0.2%磷酸二氢钾。处理8（对照1）仅用0.2%尿素、0.2%磷酸二氢钾，处理9（对照2）仅用清水。试验参考刘权的单株区组法设计[83]，在十二年生的4株‘大五星’枇杷树上进行（树1、树2、树3、树4），每株树为一次重复，共4次重复，随机区组设计，以主枝或副主枝为小区。每重复每处理15个果穗，对供试果穗进行疏果，每果穗留3果，每处理共60个果穗、180个果。
表1 本研究所用的处理及配方
| 爱多利 | 壮果蒂灵 | 绿芬威 | |
| 1 | 4000倍 | － | － |
| 2 | － | 300000倍 | － |
| 3 | － | － | 600倍 |
| 4 | 4000倍 | 300000倍 | － |
| 5 | 4000倍 | － | 600倍 |
| 6 | － | 300000倍 | 600倍 |
| 7 | 4000倍 | 300000倍 | 600倍 |
| 8(ck1) | － | － | － |
| 9(ck2) | － | － | － |
在园区另选一株‘大五星’枇杷树（树5），不作任何处理。
2.2.2 喷施时期
现蕾期（9月）、幼果期（3月上旬左右，15℃左右）、果实快速膨大前（4月上旬左右，20℃左右，果实横径2cm左右），采用喷施的方法，每个时期喷2次，间隔5天。所有处理都在果实快速膨大前（第三次施用期）环割一刀，第三次喷施后所有处理果实套袋。
试验从2013年开始，第二年重复试验。
2.2.3 观测项目及方法试验从2013年开始，第二年重复试验。
2.2.3.1 枇杷果实变化规律观测
2.2.3.1.1 枇杷果实重量、横径、纵径变化规律观测
从12月1日起到5月18日每隔十天从树5随机采30个果实样本，测出果实重量、横径和纵径，计算平均数，用于观察‘大五星’枇杷果实生长发育规律。
2.2.3.1.2 各处理纵、横径变化测定
每个处理随机选取30个果并做标记，从12月1日起到果实成熟每隔十天测量纵、横径，每处理重复4次。用于观察各处理纵、横径变化规律。
2.2.3.2 各处理果实品质测定2.2.3.2.1 各处理果实整齐度测定
果实整齐度参考景士西的CR法[84]。果实成熟后，采摘所有处理的所有果实，用目测法选出最大果和最小果各30个，分别称重。
CR：样品整齐度系数；Xmi：样品中某个最小果重；Xmi：样品中某个最大果重。
2.2.3.2.4 各处理果实外观、剥皮难易、风味评价
每处理随机选择30个左右的果实样本，目测法观察果实外观的色泽、光洁度等，剥皮感知果实的剥皮难易；品尝法感知果实风味。
2.2.3.2.5 各处理可溶性固形物、可溶性糖、总酸、维生素C测定
每处理随机选择30个果实样本剥皮去核后，分别捣碎混匀备用。
每处理取捣碎后的果浆20 ml，用干净干燥的纱布过滤，将过滤后的果浆滴2-3滴在折光仪上，读取折光仪数据，每处理重复4次，取平均值，测得可溶性固形物。
可溶性糖：参考熊庆娥的测定方法标准并略作修改，每个处理准确称取捣碎后的果肉1.000g与研钵中，加石英砂研磨至匀浆，静置1h后过滤，用蒸馏水定容至100mL的容量瓶中，吸取溶液5mL用蒸馏水稀释，定容至100mL容量瓶，然后取稀释后的溶液于试管中，先后加入蒽酮试剂和浓硫酸，盖上试管口，快速摇动后沸水浴1min，取出放入冷水中冷，20min后，在620nm波长下，试剂空白调零，测定吸光值（A620），每处理重复4次[85]。
标准曲线的制作：将每支试管编号，按照表2分别加入试剂，测定吸光值（A620）。
每处理取捣碎后的果浆20 ml，用干净干燥的纱布过滤，将过滤后的果浆滴2-3滴在折光仪上，读取折光仪数据，每处理重复4次，取平均值，测得可溶性固形物。
可溶性糖：参考熊庆娥的测定方法标准并略作修改，每个处理准确称取捣碎后的果肉1.000g与研钵中，加石英砂研磨至匀浆，静置1h后过滤，用蒸馏水定容至100mL的容量瓶中，吸取溶液5mL用蒸馏水稀释，定容至100mL容量瓶，然后取稀释后的溶液于试管中，先后加入蒽酮试剂和浓硫酸，盖上试管口，快速摇动后沸水浴1min，取出放入冷水中冷，20min后，在620nm波长下，试剂空白调零，测定吸光值（A620），每处理重复4次[85]。
标准曲线的制作：将每支试管编号，按照表2分别加入试剂，测定吸光值（A620）。
表2 试剂加入顺序与用量
|
试剂 reagent |
试管号The number of tube | |||||
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | |
|
100ug/mL蔗糖标准溶液（ml） Standard liquid of dextrose |
0.0 | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1.0 |
|
蒸馏水（ml） Aquastillata |
2.0 | 1.8 | 1.6 | 1.4 | 1.2 | 1.0 |
|
蒽酮试剂（ml） Anthrone reagent |
0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
|
硫酸（ml） Vtriolic |
5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 | 5.0 |
|
葡萄糖含量（㎍） Content of destrose |
0.0 | 20.0 | 40.0 | 60.0 | 80.0 | 100.0 |
上式中，W：待测样品鲜重（mg）；m：从标准曲线上查的糖含量（㎍）；V：样品总体积（ml）；V1：测定时取样体积（ml）；D：稀释倍数；1000：样品重量由mg换算为㎍的倍数。
总酸：参考张意静的测定方法，每个处理准确称取捣碎混匀后的果肉20.0g，加入石英砂研磨至匀浆，然后用去CO2蒸馏水洗入250mL容量瓶，定容后摇匀，过滤后吸取50 mL滤液于锥形瓶中，加入1%酚酞溶液1滴，用己标定的NaOH标准溶液（0.1mol/L）滴定至溶液有微红色出现，摇晃30S内红色未消失，记录所消耗的氢氧化钠溶液体积，每处理重复4次[86]。
总酸：参考张意静的测定方法，每个处理准确称取捣碎混匀后的果肉20.0g，加入石英砂研磨至匀浆，然后用去CO2蒸馏水洗入250mL容量瓶，定容后摇匀，过滤后吸取50 mL滤液于锥形瓶中，加入1%酚酞溶液1滴，用己标定的NaOH标准溶液（0.1mol/L）滴定至溶液有微红色出现，摇晃30S内红色未消失，记录所消耗的氢氧化钠溶液体积，每处理重复4次[86]。
上式中，C：NaOH标准溶液浓度（mol/L）；V1：滴定时用掉的NaOH标准溶液体积（ml）；V0：滴定时消耗的样品溶液体积（ml）；m(V)：称取的样品重量（g）；250：样品定容后的体积（ml）；0.067：换算成苹果酸克数的系数。
维生素C：参考李锡香的实验方法，每个处理准确称取捣碎混匀后的果肉30.0g左右，加入50ml浓度2%的草酸，加适量石英砂研磨至匀浆，称匀浆总重量，再称取20.00g左右的样品匀浆至100ml容量瓶中，加入2%的草酸溶液定容后过滤，用洗耳球吸取定容后的样品溶液至50ml的三角瓶中，用标定后的2,6-二氯靛酚滴定，溶液变成粉红色且15s不褪色，记录消耗的2,6-二氯靛酚溶液体积[87]。
维生素C：参考李锡香的实验方法，每个处理准确称取捣碎混匀后的果肉30.0g左右，加入50ml浓度2%的草酸，加适量石英砂研磨至匀浆，称匀浆总重量，再称取20.00g左右的样品匀浆至100ml容量瓶中，加入2%的草酸溶液定容后过滤，用洗耳球吸取定容后的样品溶液至50ml的三角瓶中，用标定后的2,6-二氯靛酚滴定，溶液变成粉红色且15s不褪色，记录消耗的2,6-二氯靛酚溶液体积[87]。
上式中，V为滴定时消耗的2,6-二氯靛酚溶液体积（ml）；W为样品鲜重（g）；A1为滴定时吸取的样品溶液体积（ml）；A为样品溶液定容体积（ml）；G1为样品定容时称取的样品匀浆重量（g）；T为1ml2,6-二氯靛酚溶液所氧化的抗坏血酸mg数（mg/ml）。
2.2.3.3 各处理叶片形态、叶片叶绿素含量和光合速率测定
在喷施15天后，观察每个处理嫩叶的颜色，将各个处理的嫩叶按照颜色差异进行分级（如：翠绿 中绿 深绿 淡绿 嫩绿等）。
在每次喷施5天后，用便携式光合仪到果园测定叶片的光合速率（Pn），蒸腾速率（Tr）、气孔导度（Gs），测定在上午8-10点，测枝条的第3—4片叶，每处理的每个重复取5个叶片，取平均数，每处理重复4次。
叶片叶绿素含量测定：在每次喷施5天后，每个处理随机选取完整无病虫害、长势良好的叶片5片，去除掉叶片表面的灰尘，用打孔器在叶片在打取直径为0.25—2.00mm的小圆片，称重后放入研钵，在研钵中加入适量的80%的丙酮和石英砂，研磨成匀浆后再加入3ml80%丙酮，继续研磨，直到匀浆变成白色，在无光条件下处理3min，过滤至25ml容量瓶，用80%的丙酮定容。将定容后的待测溶液装入厚度为1cm的比色皿，将80%丙酮作为对照，测定波长为663、652、645nm处的吸光度，每样品重复3次，每处理重复4次。
叶绿素a(Ca)=12.7A663-2.59A645
叶绿素b(Cb)=22.9A645-4.67A663
叶绿素总量=Ca+b
在每次喷施5天后，用便携式光合仪到果园测定叶片的光合速率（Pn），蒸腾速率（Tr）、气孔导度（Gs），测定在上午8-10点，测枝条的第3—4片叶，每处理的每个重复取5个叶片，取平均数，每处理重复4次。
叶片叶绿素含量测定：在每次喷施5天后，每个处理随机选取完整无病虫害、长势良好的叶片5片，去除掉叶片表面的灰尘，用打孔器在叶片在打取直径为0.25—2.00mm的小圆片，称重后放入研钵，在研钵中加入适量的80%的丙酮和石英砂，研磨成匀浆后再加入3ml80%丙酮，继续研磨，直到匀浆变成白色，在无光条件下处理3min，过滤至25ml容量瓶，用80%的丙酮定容。将定容后的待测溶液装入厚度为1cm的比色皿，将80%丙酮作为对照，测定波长为663、652、645nm处的吸光度，每样品重复3次，每处理重复4次。
叶绿素a(Ca)=12.7A663-2.59A645
叶绿素b(Cb)=22.9A645-4.67A663
叶绿素总量=Ca+b
3 结果与分析
3.1 三种叶面喷施液对‘大五星’枇杷果实生长发育的影响
3.1.1 ‘大五星’枇杷果实生长发育动态
经观测，‘大五星’枇杷果实生长发育呈单S型曲线变化（图1、图2）。
观测了2013年12月1日至2014年5月28日期间果实变化情况，由图1可以看出，‘大五星’枇杷果实和果肉重量在2月20日前增长非常缓慢，果实平均日增长量仅为0.04g，3月1日至4月10日期间开始快速增长，平均日增长量为0.21 g，特别是4月10日之后至4月30增长达到最快，平均日增长量达到0.72g，5月10之后基本停止增长。
由图1可以看出，枇杷种子在3月1日之前生长极为缓慢，3月1日至3月20日之间快速生长，平均日增长量为0.075g，3月20日之后缓慢生长直至停止，种子生长曲线也为单S型。
由图2可以看出，‘大五星’枇杷果实纵、横径为单S型变化规律。与果实和果肉生长规律一样，在2月20日之前纵、横径缓慢增长，2月20日至4月30日快速增长，5月10日后逐渐停止生长。
3.1.1 ‘大五星’枇杷果实生长发育动态
经观测，‘大五星’枇杷果实生长发育呈单S型曲线变化（图1、图2）。
观测了2013年12月1日至2014年5月28日期间果实变化情况，由图1可以看出，‘大五星’枇杷果实和果肉重量在2月20日前增长非常缓慢，果实平均日增长量仅为0.04g，3月1日至4月10日期间开始快速增长，平均日增长量为0.21 g，特别是4月10日之后至4月30增长达到最快，平均日增长量达到0.72g，5月10之后基本停止增长。
由图1可以看出，枇杷种子在3月1日之前生长极为缓慢，3月1日至3月20日之间快速生长，平均日增长量为0.075g，3月20日之后缓慢生长直至停止，种子生长曲线也为单S型。
由图2可以看出，‘大五星’枇杷果实纵、横径为单S型变化规律。与果实和果肉生长规律一样，在2月20日之前纵、横径缓慢增长，2月20日至4月30日快速增长，5月10日后逐渐停止生长。
表3 ‘大五星’枇杷果实纵径、横径、单果重、果肉重量、种子重量变化动态
| 时间 | 单果重（g） | 纵径（cm） | 横径（cm） | 果肉（g） | 种子重量（g） |
| 2013/12/1 | 1.12±0.01 | 0.43±0.00 | 0.33±0.00 | 1.01±0.00 | 0.11±0.00 |
| 2013/12/10 | 1.36±0.00 | 0.50±0.00 | 0.40±0.00 | 1.22±0.01 | 0.14±0.00 |
| 2013/12/20 | 1.6l±0.01 | 0.62±0.00 | 0.48±0.00 | 1.44±0.01 | 0.17±0.00 |
| 2013/12/30 | 1.80±0.01 | 0.78±0.00 | 0.57±0.00 | 1.60±0.02 | 0.20±0.00 |
| 2014/1/10 | 2.07±0.02 | 0.86±0.00 | 0.64±0.00 | 1.84±0.01 | 0.23±0.00 |
| 2014/1/20 | 2.29±0.01 | 1.08±0.01 | 0.72±0.00 | 2.04±0.01 | 0.25±0.00 |
| 2014/1/30 | 2.50±0.01 | 1.21±0.01 | 0.82±0.00 | 2.22±0.03 | 0.28±0.00 |
| 2014/2/10 | 2.81±0.03 | 1.30±0.01 | 0.90±0.00 | 2.50±0.01 | 0.31±0.00 |
| 2014/2/20 | 3.17±0.02 | 1.41±0.02 | 1.02±0.00 | 2.83±0.01 | 0.34±0.00 |
| 2014/3/1 | 4.43±0.06 | 1.61±0.03 | 1.25±0.00 | 3.36±0.03 | 1.07±0.01 |
| 2014/3/10 | 6.2l±0.09 | 1.80±0.02 | 1.52±0.00 | 3.89±0.04 | 2.32±0.00 |
| 2014/3/20 | 8.29±0.05 | 2.08±0.02 | 1.81±0.00 | 5.71±0.08 | 2.58±0.03 |
| 2014/3/30 | 10.38±0.28 | 2.29±0.01 | 2.10±0.00 | 7.74±0.16 | 2.64±0.02 |
| 2014/4/10 | 12.65±0.36 | 2.65±0.01 | 2.36±0.01 | 9.95±0.08 | 2.701±0.01 |
| 2014/4/20 | 18.18±0.39 | 2.93±0.01 | 2.63±0.00 | 15.40±0.46 | 2.78±0.02 |
| 2014/4/30 | 28.31±0.55 | 3.25±0.01 | 3.04±0.00 | 25.47±0.71 | 2.84±0.01 |
| 2014/5/10 | 34.36±0.29 | 3.26±0.02 | 3.09±0.01 | 31.42±0.88 | 2.94±0.01 |
| 2014/5/18 | 35.43±0.87 | 3.34±0.01 | 3.11±0.03 | 32.43±0.98 | 3.00±0.04 |
| 2014/5/28 | 36.15±0.97 | 3.44±0.03 | 3.23±0.02 | 33.13±0.87 | 3.03±0.03 |
3.1.2 不同处理对‘大五星’枇杷果实纵、横径变化影响
从12月1日起，每隔10天观测了不同处理枇杷果实纵、横径变化情况，结果表明，不同处理对‘大五星’枇杷果实纵、横径变化有显著影响，但所有处理都未改变其基本变化规律。在12月1日第一次测量果实纵横径时，各处理纵横径均不同程度地高于对照。
与对照相比（处理8、处理9），各处理对枇杷果实纵径都有一定的促进作用，且有显著影响，其中处理2、3、6显著地促进了枇杷果实纵径生长，效果最好。在3月1日至4月30日，果实纵径增长达到高峰，其中处理2平均日增长量最高达到0.047cm，处理6仅次于处理2为0.043cm，高于CK1（0.034cm）和CK2（0.035cm）。由表4可以看出，在整个观测期内，处理6的果实纵径净增长量最大（3.609cm），极显著高于其它处理，处理2、3、6果实采摘时纵径显著高于其它处理，其中处理6纵径（4.480cm）最大，比CK1和CK2分别大0.808cm和1.039cm，处理3（4.427cm）次之，比CK1和CK2分别大0.755cm和0.986cm。
与对照相比（处理8、处理9），各处理对枇杷果实横径都有一定的促进作用，且有显著影响。在3月1日至4月30期间，果实横径增长最快，其中处理3、处理6增长最快，日增长量分别达到0.041cm和0.042cm，CK1和CK2分别为0.031cm和0.029cm。出表4可以看出，在整个观测期内，处理6的果实横径净增长量最大（3.542cm），显著高于其它处理，处理3和处理6果实采摘时横径极显著高于其它处理，分别为4.109cm和4.108cm，CK1和CK2分别为3.237cm和3.221cm。综上，综合考虑各处理果实纵径和横径的大小，处理6（壮果蒂灵+绿芬威）效果最好，处理3（绿芬威）次之。
从12月1日起，每隔10天观测了不同处理枇杷果实纵、横径变化情况，结果表明，不同处理对‘大五星’枇杷果实纵、横径变化有显著影响，但所有处理都未改变其基本变化规律。在12月1日第一次测量果实纵横径时，各处理纵横径均不同程度地高于对照。
与对照相比（处理8、处理9），各处理对枇杷果实纵径都有一定的促进作用，且有显著影响，其中处理2、3、6显著地促进了枇杷果实纵径生长，效果最好。在3月1日至4月30日，果实纵径增长达到高峰，其中处理2平均日增长量最高达到0.047cm，处理6仅次于处理2为0.043cm，高于CK1（0.034cm）和CK2（0.035cm）。由表4可以看出，在整个观测期内，处理6的果实纵径净增长量最大（3.609cm），极显著高于其它处理，处理2、3、6果实采摘时纵径显著高于其它处理，其中处理6纵径（4.480cm）最大，比CK1和CK2分别大0.808cm和1.039cm，处理3（4.427cm）次之，比CK1和CK2分别大0.755cm和0.986cm。
与对照相比（处理8、处理9），各处理对枇杷果实横径都有一定的促进作用，且有显著影响。在3月1日至4月30期间，果实横径增长最快，其中处理3、处理6增长最快，日增长量分别达到0.041cm和0.042cm，CK1和CK2分别为0.031cm和0.029cm。出表4可以看出，在整个观测期内，处理6的果实横径净增长量最大（3.542cm），显著高于其它处理，处理3和处理6果实采摘时横径极显著高于其它处理，分别为4.109cm和4.108cm，CK1和CK2分别为3.237cm和3.221cm。综上，综合考虑各处理果实纵径和横径的大小，处理6（壮果蒂灵+绿芬威）效果最好，处理3（绿芬威）次之。
| 处理 | 果实纵径（cm） | 纵径净增长（cm） | 果实横径（cm） | 果实横径净增长（cm） |
| 1 | 3.957±0.061BCcd | 3.221±0.106De | 3.773±0.111Bb | 3.338±Cc |
| 2 | 4.440±0.111Aab | 3.577±0.084Bbc | 3.958+0.061Aa | 3.392±0.111BCc |
| 3 | 4.438±0.111Aab | 3.579±0.068ABb | 4.109±0.111Aa | 3.484±0.116ABb |
| 4 | 4.247±0.114Bb | 3.204±0.106Cc | 3.731±0.061Bb | 3.155±0.113Cc |
| 5 | 4.40740.058Bc | 3.432±0.078Cd | 3.755±0.117Bb | 3.209±0.11ICc |
| 6 | 4.480±0.170Aa | 3.609±0.112Aa | 4.108±0.111Aa | 3.542±0.098Aa |
| 7 | 3.878±0.112Cd | 3.193±0.112DEe | 3.557±0.111Ce | 3.170±0.067Dd |
| 8 | 3.668±0.111De | 3.148±0.057Ef | 3.237±0.114Dd | 2.866±0.113Ee |
| 9 | 3.4434±0.111Ef | 3.014±0.061Fg | 3.221±0.111Dd | 2.888±0.023Ee |
表4 不同处理对‘人五星’枇杷果实纵、横径的影响
注：使用邓背氏新复极差法进行检验，下同。(编辑：促化王)
